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液相色譜常見故障的判定及解決方法

  • 發布日期:2011-07-08      瀏覽次數:4361
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      液相色譜常見故障的判定及解決方法



      保留時間變化
      1.
      柱溫變化柱恒溫,必要時需配置恒溫箱
      2.
      等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
      3.
      緩沖液容量不夠>25mmol/L的緩沖液
      4.
      柱污染每天沖洗柱
      5.
      柱內條件變化穩定進樣條件,調節流動相
      6.
      柱快達到壽命采用保護柱

      保留時間縮短
      1.
      流速增加檢查泵,重新設定流速
      2.
      樣品超載降低樣品量
      3.
      鍵合相流失流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
      4.
      流動相組成變化防止流動相蒸發或沉淀
      5.
      溫度增加柱恒溫

      保留時間延長
      1.
      流速下降管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡
      2.
      硅膠柱上活性點變化用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
      3.
      鍵合相流失同前)3
      4.
      流動相組成變化同前)4
      5.
      溫度降低同前)5

      出現肩峰或分叉
      1.
      樣品體積過大用流動相配樣,總的樣品體積小于*峰的15%
      2.
      樣品溶劑過強采用較弱的樣品溶劑
      3.
      柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
      4.
      柱內燒結不銹鋼失效更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
      5.
      進樣器損壞更換進樣器轉子

      鬼峰
      1.
      進樣閥殘余峰每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
      2.
      樣品中未知物處理樣品
      3.
      柱未平衡重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑尤其是離子對色譜
      4.
      三氟乙酸(TFA)氧化肽譜每天新配,用抗氧化劑
      5.
      水污染反相通過變化平衡時間檢查水質量,用HPLC級的水

      基線噪聲
      1.
      氣泡尖銳峰流動相脫氣,加柱后背壓
      2.
      污染隨機噪聲清洗柱,凈化樣品,HPLC級試劑
      3.
      檢測器燈連續噪聲更換氘燈
      4.
      電干擾偶然噪聲采用穩壓電源,檢查干擾的來源如水浴等
      5.
      檢測器中有氣泡流動相脫氣,加柱后背壓

      峰拖尾
      1.
      柱超載降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
      2.
      峰干擾清潔樣品,調整流動相
      3.
      硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH,鈍化樣品
      4.
      同前)4 同前)4
      5.
      同前)3 同前)3
      6.
      死體積或柱外體積過大連接點降至zui低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管
      7.
      柱效下降用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱

      峰展寬
      1.
      進樣體積過大)1
      2.
      在進樣閥中造成峰擴展進樣前后排出氣泡以降低擴散
      3.
      數據系統采樣速率太慢設定速率應是每峰大于10
      4.
      檢測器時間常數過大設定時間常數為感興趣*峰半寬的10%
      5.
      流動相粘度過高增加柱溫,采用低粘度流動相
      6.
      檢測池體積過大用小體積池,卸下熱交換器
      7.
      保留時間過長等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
      8.
      柱外體積過大將連接管徑和連接管長度降至zui小
      9.
      樣品過載進小濃度小體積樣品


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